مسترمیکس HRM EvaNat از برند Notarkibco یک محلول آماده و بهینه‌شده برای انجام آزمایش‌های qPCR (واکنش زنجیره‌ای پلیمراز کمی) و HRM (تحلیل ملتینگ با وضوح بالا) است. مسترمیکس 2x EvaGreen HRM/qPCR EvaNat فاقد رنگ ROX طراحی شده و مناسب دستگاه‌هایی است که به رنگ رفرنس نیاز ندارند.
💡 این مسترمیکس از آنزیم قدرتمند HOT FIREpol DNA Polymerase بهره می‌برد که با قابلیت هات استارت، احتمال تکثیر غیر اختصاصی و تشکیل دایمرهای پرایمری را به حداقل می‌رساند. نتیجه این عملکرد، دستیابی به نتایج دقیق، حساس و تکرارپذیر در هر آزمایش است.
⚙️ کاربردها و مزایای مسترمیکس 2x EvaGreen HRM/qPCR EvaNat
1. qPCR (Quantitative PCR)
✔️ بررسی بیان ژن‌ها در شرایط مختلف زیستی.
✔️ تعیین کمی ویروس‌ها و باکتری‌ها در نمونه‌های بالینی.
✔️ تشخیص جهش‌های ژنتیکی مرتبط با بیماری‌های ارثی.
✔️ بررسی میزان آلوده‌کنندگی در نمونه‌های محیطی.
2. HRM (High-Resolution Melt)
🔥 تحلیل دقیق پلی‌مورفیسم‌های تک‌نوکلئوتیدی (SNP).
🔥 شناسایی جهش‌های ژنتیکی یا تغییرات کوچک در توالی DNA.
🔥 مطالعه اپی‌ژنتیک از طریق بررسی متیلاسیون DNA.
🔥 تشخیص دقیق تفاوت‌های کوچک در محصولات PCR.
🔥 ویژگی‌های فنی و ترکیبات محصول مسترمیکس 2x EvaGreen HRM/qPCR EvaNat
- 🧪 غلظت مسترمیکس: 2x (برای هر واکنش 20 میکرولیتری، 10 میکرولیتر مسترمیکس نیاز است)
- ⚡️ غلظت MgCl2: 1.5 میلی مولار – بهینه برای فعالیت آنزیم و افزایش دقت واکنش.
- 🌿 رنگ EvaGreen:
- اولتراپیور با قابلیت اشباع کامل در اتصال به DNA.
- تولید سیگنال‌های درخشان و پایدار بدون پس‌زمینه غیر اختصاصی.
- 🔥 آنزیم HOT FIREpol:
- دارای هات استارت برای جلوگیری از تکثیر غیر اختصاصی.
- فعال‌سازی در دمای 95 درجه سانتی‌گراد طی 5 دقیقه.
- 💧 DNTP: شامل نوکلئوتیدهای اولتراپیور با خلوص بالا برای افزایش پایداری واکنش.
- 🛑 بدون ROX: مناسب برای دستگاه‌های فاقد نیاز به ROX.
- ❄️ شرایط نگهداری:
- در دمای 20- درجه سانتی‌گراد نگهداری شود.
- پس از ذوب اولیه، مسترمیکس را به صورت الیکوت تقسیم کرده و در حجم‌های کوچک و دور از نور نگهداری کنید.
🧬 مراحل انجام واکنش با مسترمیکس 2x EvaGreen HRM/qPCR EvaNat
1️⃣ آماده‌سازی واکنش PCR
برای انجام یک واکنش 20 میکرولیتری:
- 10 میکرولیتر مسترمیکس 2x EvaNat
- 2 میکرولیتر پرایمر فوروارد (10 پیکومول)
- 2 میکرولیتر پرایمر ریورس (10 پیکومول)
- 2 میکرولیتر DNA الگو
- 6 میکرولیتر آب گرید PCR
✔️ پس از افزودن ترکیبات، درب لوله‌ها را بسته و به آرامی اسپین کنید تا مواد به ته میکروتیوب منتقل شوند.
2️⃣ برنامه دمایی پیشنهادی مسترمیکس 2x EvaGreen HRM/qPCR EvaNat
- فعال‌سازی آنزیم: 95 درجه سانتی‌گراد به مدت 5 دقیقه.
- سیکل‌های PCR: 35 تا 40 سیکل شامل:
- دناتوراسیون: 95 درجه به مدت 15 ثانیه.
- انیلینگ: 60 درجه به مدت 30 ثانیه.
- اکستنشن: 72 درجه به مدت 10 ثانیه.
- ملتینگ آنالیز: 60 تا 95 درجه سانتی‌گراد (برای تحلیل HRM).
⚠️ نکات تخصصی برای بهینه‌سازی عملکرد مسترمیکس 2x EvaGreen HRM/qPCR EvaNat
✅ 1. مدیریت غلظت MgCl2
غلظت MgCl2 می‌تواند عملکرد آنزیم PCR را تحت تأثیر قرار دهد.
- اگر نتایج دارای سیگنال ضعیف یا ناکامل هستند، می‌توانید غلظت MgCl2 را افزایش دهید.
- در صورت مشاهده پس‌زمینه غیر اختصاصی، غلظت MgCl2 را کاهش دهید.
✅ 2. انتخاب دمای مناسب برای انیلینگ
دمای انیلینگ باید بر اساس دمای ذوب پرایمرها (Tm) تعیین شود.
- اگر دمای انیلینگ خیلی پایین باشد → اتصال غیر اختصاصی پرایمرها.
- اگر خیلی بالا باشد → کاهش کارایی تکثیر.
✅ 3. تعداد سیکل‌های مناسب
- برای نمونه‌های دارای DNA کم، 40 تا 45 سیکل توصیه می‌شود.
- برای نمونه‌های پر غلظت، 35 سیکل کافی است.
✅ 4. استفاده از کنترل منفی و مثبت
- کنترل منفی: بدون DNA الگو برای بررسی آلودگی.
- کنترل مثبت: DNA استاندارد برای بررسی صحت واکنش.
🔥 چالش‌های رایج در qPCR و HRM و راهکارها
🔴 1. تشکیل دایمر پرایمرها
- علت: غلظت بالای پرایمر یا دمای انیلینگ پایین.
- راهکار: افزایش دمای انیلینگ و کاهش غلظت پرایمرها.
🔴 2. سیگنال ضعیف یا نامنظم
- علت: کمبود DNA یا عدم بهینه‌سازی چرخه‌ها.
- راهکار: افزایش تعداد سیکل‌ها یا افزایش غلظت DNA.
🔴 3. نتایج غیر اختصاصی در HRM
- علت: MgCl2 زیاد یا آنزیم بی‌کیفیت.
- راهکار: تنظیم غلظت MgCl2 و استفاده از مسترمیکس‌های باکیفیت مانند EvaNat.
🎯 کاربردهای گسترده مسترمیکس 2x EvaGreen HRM/qPCR EvaNat
✅ در تحقیقات ژنتیکی:
- تشخیص جهش‌های مرتبط با بیماری‌های ارثی.
- بررسی بیان ژن در شرایط آزمایشگاهی.
- مطالعه اپی‌ژنتیک (مانند بررسی متیلاسیون).
✅ در بیوتکنولوژی پزشکی:
- تشخیص عفونت‌های ویروسی و باکتریایی.
- بررسی میزان بیان ژن‌های مرتبط با داروها.
- توسعه تست‌های تشخیصی.
✅ در حوزه داروسازی:
- بررسی تاثیر داروها بر بیان ژن.
- پایش اثربخشی درمان‌های ژنتیکی.
- آنالیز داروهای ضد سرطان با qPCR.
✅ در زیست‌شناسی مولکولی:
- تشخیص SNP و جهش‌های ژنی.
- بررسی تغییرات بیان ژن در شرایط محیطی.
- پایش عملکرد ژن‌های مقاوم به استرس.
✅ جمع‌بندی
مسترمیکس 2x EvaGreen HRM/qPCR | EvaNat برند نوترکیب با فرمولاسیون بهینه و آنزیم HOT FIREpol، یک گزینه حرفه‌ای برای انجام آزمایش‌های ژنتیکی است.
✔️ نتایج تکرارپذیر و دقیق
✔️ ماندگاری و پایداری بالا
✔️ حداقل آلودگی و دایمر پرایمر
✔️ سازگار با دستگاه‌های qPCR بدون ROX
💡 این محصول شرکت نوترکیب آزما برای پژوهشگران، آزمایشگاه‌های بالینی و شرکت‌های دارویی، گزینه‌ای ایده‌آل و قابل اعتماد است. مسترمیکس 2x EvaGreen HRM/qPCR EvaNat ، محصولی ساخت ایران می باشد که کارایی بالاتر نسبت به نمونه های خارجی دارد، این محصول ساخت شرکت دانش بنیان نوترکیب می باشد.
نظرات کاربران